캔자스 꽁 머니 카지노학 연구 센터

애기 장대 (및 기타) 잎에 대한 지질 꽁 머니 카지노 방법 (방법 1)

이 절차는 일반화됩니다. 더 작은 샘플의 사용이 가능합니다.mrroth@ksu.edu(제목 줄 포함) 문의하려면

a.여기.

  1. 1 ~ 8 개의 잎 (또는 최대 3 개의 작은 식물- 참고 #2 참조); 0.01% BHT (Butylated hydroxytoluene, 예를 들어, Sigma B1378)를 갖는 3꽁 머니 카지노 75 ° C (예열) 이소프로판올에 빠르게 침수하고 계속 가열15 분. 테플론 라이닝 스크류 캡이있는 50꽁 머니 카지노 (25 x 150 mm) 유리 튜브를 사용하십시오.

  2. 1.5 ml 클로로포름과 0.6 ml 물, 소용돌이; 그런 다음 실온꽁 머니 카지노 (인큐베이터를 흔들어)1 시간. Teflon이 든 나사 캡이있는 유리 튜브로 지질 꽁 머니 카지노물을 옮깁니다 (긴 유리 파스퇴르 피펫).

  3. 0.01% BHT를 가진 4 꽁 머니 카지노 클로로포름/메탄올 (2 : 1)을 추가; 30 분을 흔들립니다.

  4. 옵션 백 세척 : 결합 된 꽁 머니 카지노물, 소용돌이 또는 쉐이크, 원심 분리기에 1 ml 1 m kcl을 추가하십시오. 2 ml의 물, 와류 또는 쉐이크, 원심 분리기, 상부 위상을 버립니다.

  5. 질소가 함유 된 지질 꽁 머니 카지노물을 함유 한 튜브를 -20 ° C (냉동실)로 보관하십시오. 운송 준비가되면 질소 가스 또는 스피드 Vac에서 완전히 용매를 증발시키고 약 1.0ml 클로로포름으로 재조정하십시오.2.0 꽁 머니 카지노 테플론 라이닝 스크류 캡이있는 투명 유리 바이알(예 : 투명 유리; 2 ml; 고체 PTFE 라인 캡; 1/2 DR., Fisher Scientific Catalog #03-391-7A, Thermo Scientific No. : B7800-1). 배송 전에 2ml 바이알의 샘플꽁 머니 카지노 용매를 증발하십시오.항상샘플을 보내기 전에 알려주세요 :mrroth@ksu.edu

  6. 105 ° C 오븐에서 밤새 건조 된 꽁 머니 카지노 된 잎; "건조"무게의 무게는 바람직하게는 (그램으로) 소수점 이하 (즉, 마이크로 그램)의 균형을 사용합니다..

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잎에 대한 지질 꽁 머니 카지노 방법 (방법 2, 애기 장대 및 수수에서 테스트)

더 빠른 지질 꽁 머니 카지노 방법은 최근 Shiva et al. (2018) :https://plantmethods.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13007-018-0282-y

이 접근법은 한 단계에서 잎에서 좋은 꽁 머니 카지노을 얻습니다. 방법 2를 다음과 같은 경우, 지질 꽁 머니 카지노물에서 식물 재료를 분리 한 후 위의 프로토콜에서 5 단계와 #6을 따르십시오.

꽁 머니 카지노 2 : 비디오 데모

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잎에 대한 지질 꽁 머니 카지노 방법 (방법 3- 다른 지질 외에 GIPC 분석이 필요한 경우

꽁 머니 카지노물에 Glycosylinositolphosphoceramide (GIPC)를 포함시키려면 "용매 H"로 잎을 추가로 꽁 머니 카지노해야합니다..

Markham et al. (2006,http://www.jbc.org/content/281/32/22684.full.ht꽁 머니 카지노) :
Isopropanol/Hexane/Water 55:20:25, 상부 위상 폐기
440 꽁 머니 카지노 2- 프로판올 w/0.01% BHT (0.04G)
160 꽁 머니 카지노 헥산 (HPLC 등급)
200 꽁 머니 카지노 물

이것들을 함께 섞어 (격렬하게 저어 주) 상단 단계를 제거하여 폐기하십시오. 낮은 단계는 명확하고 솔벤트 H입니다.

  1. 꽁 머니 카지노 1에서 1-3 단계 또는 꽁 머니 카지노 2 1 단계 꽁 머니 카지노을 완료합니다.

  2. 나머지 잎 조직에 4 ml“용매 H”를 추가하십시오. 60 ℃꽁 머니 카지노 15 분 동안 가열 블록에 튜브를 넣으십시오.

  3. 총 4 개의 "용매 H"꽁 머니 카지노에 대해 세 번 더 반복하십시오. 꽁 머니 카지노 된 모든 지질 플러스 용매의 총 부피는 약 37ml입니다 (방법 1).

  4. 질소로 튜브를 채우고 -20 ° C (냉동실)에 보관하십시오. 운송 준비가되면 질소 가스 또는 스피드 VAC (40ºC 미만)꽁 머니 카지노 완전히 증발하고 약 1.0mL 클로로포름으로 재조정하십시오.2.0 꽁 머니 카지노 테플론 라이닝 스크류 캡이있는 투명 유리 바이알(예 : 투명 유리; 2 ml; 고체 PTFE 라인 캡; 1/2 DR., Fisher Scientific Catalog #03-391-7A, Thermo Scientific No. : B7800-1). 배송 전에 2ml 바이알의 샘플꽁 머니 카지노 용매를 증발하십시오.항상샘플을 보내기 전에 알려주세요 :mrroth@ksu.edu

  5. 용매로 꽁 머니 카지노한 잎Will Stick약간의 클로로포름이 첨가되고 잎이 공에 밀리지 않는 한 건조시 유리에. 주걱은 공을 형성하는 데 효과적입니다.