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MONOCOT 사설 카지노 분리

1. 신선한 조직을 수집하고 -20°C에 보관하세요.
2. 잎 조직을 미리 냉각된 막자사발에 액체 질소와 함께 미세한 분말로 갈아주세요 [절구와 유봉은 -20°C 또는 -80°C에 보관하세요].
3. 차가운 붓으로 갈아 놓은 조직을 잘 차갑게 식힌 50ml 폴리프로필렌 튜브에 넣고 -20°C에 보관하세요.가루가 녹지 않도록 하세요.모든 도구는 액체 질소로 냉각되어야 합니다.
4. 추출 버퍼에 중아황산나트륨을 추가하고 5N NaOH를 사용하여 pH를 7.8~8.0으로 조정합니다. 추출 완충액을 65°C로 가열하고 냉동 조직 10~15ml에 15~20ml를 추가합니다.

1. 65°C 수조에서 30분 동안 배양합니다. 5~10분마다 튜브를 거꾸로 뒤집습니다.
2. 클로로포름:이소아밀 알코올 [24:1 v/v]을 튜브 상단에 추가하고 세게 섞습니다.
3. 4,500rpm에서 15분간 원심분리합니다. 간기가 단단해 보이지 않으면 상부 상을 2~4겹의 무명천으로 붓거나 피펫을 사용하여 상부 상을 새로운 50ml 튜브로 옮깁니다.
4. 차가운 [-20°C] 95% EtOH를 2배량(튜브를 맨 위로 채움) 추가하고 천천히 섞어 사설 카지노를 침전시킵니다. -20°C에 30~60분 동안 두세요.
5. 95% EtOH를 붓고 새로운 70% EtOH로 세척한 다음 차가운 70% EtOH 30ml를 추가합니다. 몇 분 동안 부드럽게 섞으세요.
6. 사설 카지노가 여전히 변색된 경우 새로운 70% EtOH로 다시 세척하십시오. 파스퇴르 피펫에 사설 카지노를 연결하여 제거하고 Kimwipe로 과도한 70% EtOH를 닦아냅니다.
7. 사설 카지노를 용해불임TE [펠릿 크기에 따라 0.5-1mL].
8. 미소원심분리기에서 13,000rpm으로 10분간 원심분리하여 용액에 들어가지 않는 물질을 제거합니다.
9. 마커(10, 20, 50 및 80ng 농도의 절단되지 않은 람다 사설 카지노)와 함께 아가로스 겔에서 1:20 희석[1 사설 카지노:20 TE:1 로딩 완충액]을 분리하여 사설 카지노 농도를 결정합니다. .