염색체에 대한 프로브의 비오틴 라벨링 및 메이저사이트

제안 된 화학 물질 : Nick Translation Kit, Enzo Diagnostics Cat. No. 42803.

플라스미드 또는 게놈 DNA의 메이저사이트 표지

1. -70 ° C 냉동고에서 슬라이드를 제거하고 면도날로 덮개 슬립을 제거한 다음 에탄올 시리즈 (70%, 95%, 100%에탄올; 5 분)에서 슬라이드를 건조시킵니다. 슬라이드는 ish 전에 몇 시간 동안 건조해야합니다.
2. 다음 메이저사이트 화 혼합물을 준비하십시오. 10 ㎕의 메이저사이트 화 믹스는 한 슬라이드에 사용되며 '18 x 18 '커버 슬립으로 덮여있다.

Deionized Formamide	10 µL
20 X SSC	2 µg
전단 연어 정자 메이저사이트 (10 mg/ml)	2 µL
메이저사이트 DNA	0.5-2 µL
탈 이온 또는 증류수	X µL
50 % 덱스 트란 설페이트	4 µL
총 반응 부피 (h2o 총 부피를 20 ㎕로 조정하려면	20 µL

1. 게놈 ISH의 경우, 메이저사이트 화 혼합물을 다음과 같이 준비하십시오. 전단 차단 DNA의 양은이 절차에서 가장 중요한 부분입니다.

Deionized Formamide	10 µL
20 X SSC	2 µg
전단 연어 정자 메이저사이트 (10 mg/ml)	2 µL
메이저사이트 DNA	1 µL
차단 메이저사이트	1μL
50 % 덱스 트란 설페이트	4 µL
총 반응 부피 (h2o 총 부피를 20 ㎕로 조정하려면	20 µL

염색체에 대한 메이저사이트 하이브리드 화

1. 5 분 동안 75 ° C에서 5 분 동안 얼음을 즉시 냉각하고 용액을 돌려 혼합물을 변성합니다..
2. 슬라이드를 2 x SSC (140 ml 포름 아미드 + 20 ml 20 x SSC + 40 ml H에서 70 % 포름 아미드에 70 % 포름 아미드에 슬라이드 홀더를 사용하여 배치합니다.₂o,이 솔루션은 여러 번 사용할 수 있습니다. 포름 아미드의 품질이 중요합니다. i.
3. 슬라이드를 에탄올 시리즈 (각각 20 ° C에서 각각 70%, 95%및 100%, 5 분)로 즉시 옮기고 슬라이드를 공기 건조시킵니다.
4. 각 슬라이드에 10 ㎕의 메이저사이트 화 혼합물을 추가하고 '18 x 18 'mm 커버 슬립으로 덮으십시오. 촉촉한 챔버에 슬라이드를 놓으십시오 (모든 종류의 상자는 습식 2 층의 3mm Whatman 용지와 함께 사용될 수 있습니다. 플라스틱 막대를 사용하여 슬라이드를 고정하십시오..
5. 촉촉한 챔버의 슬라이드를 37 ° C에서 최소 6 시간 또는 하룻밤 동안 인큐베이션하십시오.