밀 꽁 머니 카지노학

형광 플러스 giemsa (카지노 입플) 기술

다음 프로토콜은 양파와 호밀 용이지만 다른 식물 종에도 적용해야합니다. 안에Allium cepaandSecale Cereale, 25 ℃에서의 세포주기 시간은 약 12 ​​시간이다. 따라서, BRDU를 함유하는 배지에서 24 시간 동안 뿌리 팁을 처리하면 염색체가 4 개의 DNA 다항식 가닥 중 3 개에 BRDU의 혼입을 나타내는 충분한 수의 은유를 초래하고, 카지노 입플 염색 후 자매 크로마 티드의 차등 염색을 허용한다.

    1. 20 ° C카지노 입플 페트리 접시에 촉촉한 필터 종이에 씨앗을 발아시킵니다.
    2. 뿌리 팁의 길이가 약 1-1.5cm 인 경우 15 개의 묘목을 큰 페트리 접시 ( 20cm)로 옮기고 125ml의 새로 준비된 치료 매체를 포함합니다. 치료 매체는 10으로 구성됩니다.-4M BRDU, 5 x 10-8M FDU 및 10-6m urd, 수돗물에 용해. 25 ° C에서 어둠에서 7 시간 동안 뿌리 팁을 배양합니다 (FDU는 티미 딘의 합성을 억제함으로써 THD를 DNA로 혼입하는 것을 억제하기 때문에 첨가된다. 카지노 입플 딘은 RNA 합성에 대한 FDU의 부정적인 영향을 피하기 위해 첨가된다..
    3. 루트 팁을 동일한 조성물의 125 mL 신선한 매체로 전송하고 25 ℃카지노 입플 어둠카지노 입플 17 시간 동안 배양; 또는 10으로 구성된 125ml의 새로 준비된 매체-4m thd 및 10-6m 수돗물에 용해 된 우르드; 25 ° C카지노 입플 어둠 속카지노 입플 17 시간 동안 배양합니다.
    4. 지난 3 시간 동안 콜히친 추가 (최종 농도 0.05 %)
    5. 수정Carnoy 's I적어도 5 ° C카지노 입플 밤새
    6. 뿌리 팁을 2-3 분 동안 45 % 아세트산으로 전달하거나 조직을 부드럽게하기 위해 펙 티나 ​​제/셀룰라아제 또는 세포 효소로 소화하십시오.
    7. 45 % 아세트산으로 스쿼시 준비를합니다. 위상 대비 하에서 확산의 품질을 점검하고 아래에 설명 된 카지노 입플-Technique에 acoording.
    8. 드라이 아이스로 덮개 슬립 제거.
    9. 통과 통과 96 %, 70 %, 50 %및 30 %에탄올 시리즈, 증류수, 마지막으로 공기 건조.
    10. 0.5 x SSC에 용해 된 0.01 % 리보 뉴 클레아 제 A (소 췌장카지노 입플 시그마 R-4875)로 1 시간 동안 슬라이드를 처리합니다.
    11. 0.5 x ssc카지노 입플 간단히 헹굼
    12. Fluorochrome Hoechst 33258 (H 33255, Bisbenzimide, ICN Biomedicals Inc. #190304)과 30 분 동안 염색을 일으킨다.
    13. 0.5 x ssc카지노 입플 간단히 헹굼
    14. 0.5 x SSC가있는 덮개 슬라이드 및 UV Light (Osram HNS, 30W, 254 nm)에 1 h.
    15. 1 시간 동안 수조카지노 입플 55 ° C카지노 입플 0.5 x SSC카지노 입플 인큐베이션합니다.
    16. Soerensen 인산염 완충액 pH 6.8.카지노 입플 3 % Giemsa (Merck 3204)의 얼룩.
Soerensen 's Buffer
Stock stain
파트 A 인산 나트륨 인산 나트륨 dibasic (Na2HOP4) 9.47 G / L H2O 58 ml
파트 B 칼륨 디 하이드로 겐 포스페이트 (KH2po4) 9.07 G / L H2O
42 ml
  1. 0.5 x SSC카지노 입플 간단히 헹구고 공기 건조 (자일렌에 몸을 담그고 Euparal 또는 Permount에 마운트하여 영구적으로 만들 수 있습니다).

솔루션

  • 10-4m BRDU (5- 브로 모 -2'- 데 옥시 루리 딘, 시그마 B-5002) : 30.7 mg/l 증류수.
  • 10-4M THD (2'- 데 옥시 티미 딘, 시그마 T-5018) : 24.2 mg/l 증류수.
  • 10-6m urd (Uridine, Sigma U-3750) : 스톡 용액은 1.2 mg/100 ml 증류수입니다. 리터 증류수 당 20ml 스톡 용액을 추가하십시오.
  • 5 x 10-8M FDU (5- 플루오로 -2'- 데 옥시 루리 딘, 시그마 F-0503) : 스톡 용액은 1.2 mg/100 mL 증류수; 리터 증류수 당 1ml 스톡 솔루션을 추가하십시오.
  • 0.5 X SSC (88.2 g 트리-소트-시트 레이트 -2- 수선화 인 20 x SSC 스톡 솔루션 준비 (NA3C6H5O7· 2H2o) 플러스 클로라이드 나트륨, NaCl/L 증류수. 이 솔루션은 몇 달 동안 저장 될 수 있습니다.