게놈 in situ Hybridization (Gish)을위한 식물 게놈 카지노 게임 사이트의 분리
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액체 질소에 5 g의 카지노 게임 사이트 잎 조직을 갈고 (카지노 게임 사이트 재료를 해동시키지 마십시오) 분말을 250 ml 플라스크에 붓습니다..
15 ml의 2 x ctab 완충제에 분말 물질을 매달고 천천히 흔들리는 동안 1 시간 동안 수조에서 1 시간 동안 배양합니다..
2 X CTAB 완충액은 1.4 M NaCl, 100 mm Tris pH 8.0, 2% CTAB (헥사 데실 트리 메틸 아모니늄 브로마이드), 20 mM EDTA, 0.5% NA 비사 언어, 1% 2- 메르 카토 에탄올 (2-me)...
CTAB 버퍼를 만들 때 2-ME를 제외한 다른 성분이 용액에있는 후 NACL을 추가하는 것이 좋습니다. 사용 직전까지 2-ME를 추가하지 마십시오.
2-me가없는 솔루션은 실온에서 저장 될 수 있습니다.
플라스크를 실온으로 식히고 15ml 클로로포름/이소 아밀 알코올 (24 : 1)을 넣고 에멀젼이 형성 될 때까지 플라스크를 소용돌이칩니다 (실온에서 15 분 동안 플라스크를 회전식 셰이커에 배치).
샘플을 원심 분리 튜브에 넣고 실온에서 15 분 동안 10,000 rpm에서 회전합니다.
상청액을 깨끗한 튜브에 옮기고 2/3 부피의 이소 프로필 알코올을 추가하십시오. 튜브를 여러 번 뒤집습니다.
70% 에탄올로 카지노 게임 사이트 펠렛을 두 번 씻으십시오. 에탄올을 붓고 펠렛 공기가 1 시간 동안 건조하게하십시오. 500 ㎕의 TE를 추가하고 카지노 게임 사이트를 1.5ml 튜브로 옮깁니다. 5 μL RNase A (10 mg/ml)를 첨가하고 4 ° C에서 밤새 또는 37 ° C에 1 시간 동안 두십시오.
500 μL 페놀을 첨가하고 잘 섞은 다음 5 분 동안 회전합니다. 상청액을 다른 튜브로 옮깁니다.
페놀과 클로로포름의 각각 250 μl를 첨가하고 잘 섞은 다음 5 분 동안 회전합니다. 상청액을 다른 튜브로 옮깁니다.
500 μL 클로로포름을 추가하고 잘 섞은 다음 5 분 동안 회전합니다. 상청액을 10ml 튜브로 옮깁니다.
3ml의 최종 부피에 TE를 추가 한 다음 1/10 부피의 3 M NAAC 및 2 부피 100% 에탄올을 추가하십시오. 튜브를 여러 번 뒤집습니다.
70% 에탄올로 침전 된 카지노 게임 사이트를 두 번 씻으십시오. D카지노 게임 사이트를 1.5ml 튜브로 옮깁니다.
원칙적으로, 게놈 카지노 게임 사이트를 깨끗하게할수록 비오틴-표지 프로브가 더 좋습니다. 따라서, 단리 된 카지노 게임 사이트는 CSCL- 정류 절차를 사용하여 추가로 정제 될 수있다.